回答1、準(zhǔn)備工具：準(zhǔn)備鑷子、EP管、槍頭等工具，然后用高壓滅菌鍋進(jìn)行殺菌。2、消毒處理：用酒精對(duì)手掌、鑷子進(jìn)行消毒，然后取出10支EP管放入試劑盒內(nèi)。3、放入菌種：用移液槍取出甘油，放入EP管，然后再將菌種放入管內(nèi)。4、低溫保存：蓋好蓋子，做好標(biāo)注，將所有菌種都裝到袋中，再將袋子置于冰箱內(nèi)保存。

一、甘油保藏菌種實(shí)驗(yàn)步驟

1、準(zhǔn)備工具

準(zhǔn)備好鑷子、EP管、槍頭等工具，然后將其放入高壓滅菌鍋內(nèi)做殺菌處理。

2、消毒處理

將酒精擦拭在手上進(jìn)行消毒，并對(duì)鑷子做消毒處理，再用鑷子取出10支EP管并放入試劑盒中。

3、放入菌種

用移液槍取出50%的甘油，然后放入EP管中，再取出菌種放入EP管。

4、低溫保存

蓋上蓋子，并做好標(biāo)注，然后將所有菌種都裝到袋子中（袋子也要做好標(biāo)注），再將袋子放在-20℃的冰箱內(nèi)保存。

二、甘油保藏菌種原理

1、保藏原理

甘油可以作為菌種的保護(hù)劑，低溫冷凍的條件下，使微生物的新陳代謝趨于停止，從而達(dá)到長(zhǎng)期有效的保藏目的（保藏溫度越低，效果越好）。

2、注意事項(xiàng)

（1）應(yīng)使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基，因?yàn)槲⑸镌谶x擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)可能會(huì)丟失某些生物特性，而且保藏的菌種的生物特性可能和標(biāo)準(zhǔn)菌株的特性有所差異。

（2）菌液的濃度越大，菌種的保存時(shí)間一般越長(zhǎng)。保藏細(xì)菌常使用菌液，保藏霉菌常使用無(wú)菌水，或用生理鹽水制備成的孢子懸液。

（3）甘油的最終濃度為10-20%。甘油原液過(guò)于粘稠，需配制適宜的甘油水溶液，將菌懸液和甘油按照1：1的體積比例充分混勻，再分裝至經(jīng)過(guò)滅菌處理的保藏管中，放入-80℃（-70℃）的冰箱內(nèi)保存。

（4）該方法適合中長(zhǎng)期菌種保藏，保藏時(shí)間通常是2-4年左右。